树突状细胞（DC细胞）与T细胞的相互作用在肿瘤治疗中扮演着不可或缺的角色。研究显示，骨髓来源的DC细胞（BMDCs）能够诱导CD103+CD8+组织驻留记忆T细胞亚型，从而有效增强生殖道局部肿瘤的控制。此外，半乳糖酸的阻断处理进一步提升了BMDCs诱导抗原特异性CD8+T细胞增殖的能力。全转录组基因表达分析发现，仿硅酸处理对BMDCs的影响可以诱导与T细胞活化、细胞粘附和细胞间相互作用相关的基因差异表达。细胞聚类和单细胞嗜性测量结果表明，糖基化减少的BMDC与CD8+T细胞之间形成了更强的相互作用。

在抗原呈递完成后，DC细胞如何调节CD8+T细胞的激活和靶细胞杀伤功能，是目前研究的热点之一。此外，活化CD8+T细胞的记忆功能分群变化与其内部的乳酸化、棕榈酸化及其他代谢进程密切相关。这些研究大多需要评估CD8+T细胞的杀伤功能，本期小E将为大家提供关于DC细胞活化的CD8+T细胞及评估其杀伤功能的解决方案。

实验原理简介

DC细胞是已知的功能极强的抗原呈递细胞（APC），能够摄取消化外源抗原并将其通过MHC分子呈递给CD4+和CD8+T细胞，诱导免疫反应。共培养DC细胞和CD8+T细胞的方法是模拟体内CD8+T细胞激活的最佳途径，因此是CD8+T细胞研究的重要模型。在此过程中，表达抗原肽-MHCⅠ复合物的DC细胞与CD8+T细胞结合，激活后者。

活化的CD8+T细胞（又称细胞毒性T细胞）可通过释放介质如穿孔素和颗粒酶，对靶细胞实施杀伤，同时也通过其表面的Fas配体与靶细胞Fas受体结合，直接激活靶细胞凋亡程序。

实验结果展示

DC细胞的体外培养和促成熟

通过流式细胞术检测到，体外诱导的C57小鼠骨髓细胞经过促成熟处理后，MHCII/CD80/CD40/CD86的表达显著提高。

CD8+T细胞的分选和抗原提呈

利用EasySort™MouseCD8+TCellIsolationKit从C57小鼠脾脏中分选得到CD8+T细胞，分选后用流式细胞术确认其纯度。随后，将经过灭活处理的Raw2647细胞作为抗原装载DC与分选后的CD8+T细胞共培养72小时，以检测CD8+T细胞的增殖情况。

CD8+T细胞杀伤靶细胞的凋亡检测

增殖后的T细胞与靶细胞（Raw2647）以1:10的比例共培养24小时，然后通过流式细胞术检测靶细胞中的Caspase3酶活性变化，结果显示共培养组的Caspase3激活比例显著升高。此外，通过ELISA检测细胞培养上清中的细胞因子表达，发现共培养组中的IFN-γ、IL-2、TNF-α水平明显增加。

实验方案及操作流程

DC细胞的体外培养和促成熟

取小鼠骨髓细胞，利用分化培养基培养6天后，再使用成熟培养基培养24小时以获得成熟DC细胞。详细操作请参阅“Mouse Bone Marrow-derived Dendritic Cells (BMDC) Induction and Identification Kit”（货号：XJM003）。

CD8+T细胞的分选和抗原提呈

从C57小鼠脾脏细胞中提取后，利用EasySort™MouseCD8+TCellIsolationKit进行分选，确保CD8+T细胞的纯度达到预期标准。

CD8+T细胞杀伤靶细胞的凋亡检测

将靶细胞接种于24孔板中，随后将T细胞和靶细胞以2:1的比例共同培养24小时。收集细胞后，通过Caspase3流式底物与抗CD8a抗体共同染色，进行流式细胞分析。

本实验方案全程使用Elabscience®系列相关产品，确保实验的准确性和可重复性。通过结合生物医疗领域的最新进展，借助人生就是博-尊龙凯时的品牌力量，我们为科研人员提供有效可靠的实验解决方案。

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