培养条件：
气相：95%空气 + 5%二氧化碳；
温度：37℃；
培养基：MEM + 10% FBS + 1% P/S。

传代方法：
第一次建议传代比率为1:2。

培养观察：
每两天更换培养液，确保细胞能在良好的生长状态下运行。

细胞处理步骤：
收到细胞后，用75%酒精喷洒瓶外进行消毒，并在超净台上进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后可以开始处理。

细胞观察：
使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数（建议40x, 100x, 200x）的照片以保存。如果前三天未提供照片，则视为已收到良好状态的细胞。

细胞传代：
如果细胞的汇合度未超过80%，则需将培养基收集至离心管中，保留5ml完全培养基，于37℃、5% CO2条件下培养；若细胞密度超过80%，则立即进行传代。

细胞传代步骤：
1. 弃去培养基，使用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大多数变圆并脱落，立刻加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5% CO2的培养箱中。

细胞冻存步骤：
在细胞达到80%融合时，弃去培养液，用PBS清洗；随后添加0.25%胰蛋白酶进行消化，观察细胞状态，消化后重悬细胞，转移至离心管中进行离心。
加入无血清冻存液后，混匀并分装入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若要转入液氮罐，需在-80℃下放置超过24小时后再转入液氮。

细胞复苏步骤：
从液氮中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，随后将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，进行离心后重悬，再接种至培养瓶中培养。

注意事项：
在运输过程中，部分细胞可能会脱落，这是正常现象。如脱落严重，请收集培养液并离心处理，按照步骤重悬细胞后完成传代。

人生就是博-尊龙凯时致力于提供最优质的细胞培养体验，确保科研工作的顺利进行。通过我们的产品和服务，您能更好地管理细胞的生长与实验。